C端序列分析

北京百泰派克生物科技有限公司基于CNAS/ISO9001双重质量认证体系，根据肽图分析（质谱法）原理，建立了针对于不同类别生物制品的蛋白C端序列分析服务，可实现对蛋白、抗体、疫苗、多肽、重组胶原蛋白等生物制品C端序列的测定。

技术原理

目前尚未开发出类似于Edman降解的C端序列测定技术，因此蛋白C端序列的确证服务仍然是以质谱平台为基础。根据靶蛋白理论序列信息选择互补性好的两种蛋白酶酶切蛋白，产生两个长度不同但是适宜离子化的C端肽段，经质谱检测，相互验证，最终确定蛋白C端序列。

附常见蛋白酶酶切条件及位点：

实验仪器

• 纳升级高效液相色谱仪：Easy-nLC 1200；

• 组合型四极杆-Orbitrap质谱仪：Q Exactive™ Hybrid Quadrupole-Orbitrap™ Mass Spectrometer。

案例示意

样品蛋白经过适合的蛋白酶酶切之后变成长度大多在6-28aa的肽段，进入质谱分析后产生的总离子流谱图如下：

样品总离子流谱图（TIC）

（横坐标为时间（min），纵坐标为相对信号强度）

通过一级质谱图可以得到完整肽段的分子量，mass=(m/z-1)*z

C端肽段一级质谱图

（横坐标为检测到的m/z值，纵坐标为相对信号强度）

二级质谱图得到的是肽段的碎片离子m/z值，完整肽段在质谱中从肽键位置被打碎为碎片离子，靠近肽段的N端的为b离子，靠近C端的为y离子（例如二级图中的肽段KTSTSPLVKSF, 二级碎裂之后，碎片离子K和TSTSPLVKSF分别为b1和y10离子，碎片离子KT和STSPLVKSF分别为b2和y9离子）。理论的碎片离子m/z与实际二级图中的检测值匹配到的越多，可信度越高。通过肽段二级碎裂片段信息确定C端肽段序列

肽段二级质谱图

（横坐标为检测到的m/z值，纵坐标为相对信号强度）

实际项目中会至少使用两种互补的蛋白酶对靶蛋白进行酶切，可以得到两条长度不同的C端肽段，通过对于两条C端肽段序列的相互验证，最终确定蛋白的C端序列信息。


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