N端序列分析

蛋白质N端测序流程

Edman降解法用于N端测序的优点：

1. PITC与所有氨基酸残基的反应产率和回收率高，因此副产物少，可通过色谱进行准确鉴定；
2. 反应时间快，对于大多数氨基酸残基来说，30min耦合时间，5min切割反应时间即可；
3. 反应后的肽链仍然是完整的，可用Edman降解法重复测定新生的N末端氨基酸。

Edman降解法用于N端测序需要注意的问题： 

1. 样品纯度需>90%，盐离子含量在50 mmol/L之内，不含SDS等变性剂，N端必须是均一的高纯样品；
2. 10 Pmol 样品可以测定20 aa；
3. 液体样品不能含有蛋白酶，建议尽早测试，防止时间太长容易降解；
4. 转膜样品在转膜前不宜放置太久以防样品扩散，转膜后可密封保存3-6个月，建议使用Coomassie R-250进行染色，电泳缓存液建议使用CAPS buffer；
5. 样品无信号峰是，建议蛋白进行N-端封闭；
6. 建议整个反应过程中尽可能使用高纯buffer。